凱(kai)氏定(ding)氮儀(yi)原理使(shi)用步(bu)驟(zhou)

原(yuan)理

將有機(ji)化合(he)物與硫(liu)酸共(gong)熱(re)使(shi)其中的氮轉(zhuan)化為(wei)硫(liu)酸銨(an)。在這(zhe)壹(yi)步(bu)中(zhong)，經常會向混(hun)合物中加(jia)入(ru)硫(liu)酸鉀(jia)來(lai)提高中(zhong)間產物的沸點。樣(yang)本(ben)的分析過程(cheng)的終(zhong)點很(hen)好(hao)判斷(duan)，因(yin)為(wei)這(zhe)時混(hun)合物會變(bian)得無色(se)且(qie)透(tou)明（開始時很(hen)暗(an)）

在得到(dao)的溶(rong)液(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)少(shao)量氫(qing)氧化鈉(na)，然後(hou)蒸(zheng)餾。這(zhe)壹步(bu)會將銨鹽(yan)轉化成(cheng)氨。而(er)總(zong)氨量(liang)（由(you)樣(yang)本(ben)的含氮量(liang)直(zhi)接(jie)決定(ding)）會由反(fan)滴定(ding)法確定(ding)：冷(leng)凝(ning)管(guan)的末端會浸(jin)在硼(peng)酸(suan)溶(rong)液(ye)中(zhong)。氨會和(he)酸(suan)反(fan)應(ying)，而過(guo)量的酸則會在甲(jia)基橙的指(zhi)示下用(yong)碳(tan)酸鈉(na)滴定(ding)。滴定(ding)所(suo)得的結(jie)果乘以(yi)特定(ding)的轉換因(yin)子(zi)就可(ke)以(yi)得到(dao)結(jie)果

使(shi)用步(bu)驟(zhou)

消化

1、      準備6個(ge)凱(kai)氏燒瓶(ping)，標(biao)號。1、2、3號燒瓶中分別加(jia)入(ru)適(shi)當(dang)濃(nong)度(du)的蛋白(bai)溶(rong)液(ye)1.0mL，樣(yang)品(pin)要(yao)加(jia)到(dao)燒瓶(ping)底部，切(qie)勿沾在瓶(ping)口及(ji)瓶(ping)頸(jing)上。再依次(ci)加(jia)入(ru)硫(liu)酸鉀(jia)-硫(liu)酸(suan)銅接觸(chu)劑0.3g，濃(nong)硫(liu)酸(suan)2.0mL，30%過(guo)氧化氫(qing)1.0mL。4、5、6號(hao)燒瓶(ping)作(zuo)為空白(bai)對(dui)照(zhao)，用(yong)以(yi)測(ce)定(ding)試劑中(zhong)可能含有的微量含氮物質(zhi)，對(dui)樣(yang)品(pin)測(ce)定(ding)進(jin)行(xing)校正。4、5、6號(hao)燒瓶中加(jia)入(ru)蒸(zheng)餾水(shui)1.0mL代(dai)替樣(yang)液(ye)，其余所(suo)加(jia)試劑與1、2、3號(hao)燒瓶(ping)相同。2、將加(jia)好(hao)試劑的各燒瓶放置消化架(jia)上，接好(hao)抽氣(qi)裝(zhuang)置。先(xian)用(yong)微(wei)火加(jia)熱(re)煮沸，此時燒(shao)瓶(ping)內(nei)物質(zhi)炭化變(bian)黑，並(bing)產生(sheng)大量(liang)泡沫，務必(bi)註(zhu)意防(fang)止(zhi)氣泡(pao)沖(chong)出(chu)管(guan)口。待(dai)泡沫(mo)消失(shi)停(ting)止(zhi)產生(sheng)後，加(jia)大火力(li)，保(bao)持瓶(ping)內(nei)液(ye)體(ti)微沸，至溶(rong)液(ye)澄清後，再(zai)繼續(xu)加(jia)熱(re)使(shi)消化液(ye)微(wei)沸15min。在消化過(guo)程(cheng)中要(yao)隨(sui)時轉(zhuan)動(dong)燒(shao)瓶，以(yi)使(shi)內(nei)壁(bi)粘著(zhe)物質(zhi)均能流入(ru)底(di)部，以(yi)保(bao)證樣(yang)品(pin)消化。消化時放(fang)出(chu)的氣體(ti)內(nei)含SO2，具有(you)強烈(lie)刺激(ji)性，因此自始自終(zhong)應(ying)打開(kai)抽水(shui)泵將氣體(ti)抽入(ru)自來(lai)水(shui)排出(chu)。整(zheng)個(ge)消化過(guo)程(cheng)均應(ying)在通(tong)風(feng)櫥中(zhong)進(jin)行(xing)。關閉火焰，使(shi)燒瓶冷(leng)卻(que)至室溫(wen)。

儀(yi)器的洗滌

儀(yi)器安裝(zhuang)前(qian)，各部件需經(jing)壹般(ban)方(fang)法洗(xi)滌幹凈(jing)，所(suo)用(yong)橡(xiang)皮管(guan)、塞(sai)須(xu)浸(jin)在10%NaOH溶(rong)液(ye)中(zhong)，煮約10min，水(shui)洗(xi)、水(shui)煮10min，再水(shui)洗(xi)數次(ci)，然後(hou)安裝(zhuang)並(bing)固定(ding)在壹(yi)只鐵(tie)架(jia)臺(tai)上。儀(yi)器使(shi)用前(qian)，微量(liang)全部管(guan)道都(dou)須(xu)經(jing)水(shui)蒸(zheng)氣洗滌(di)，以(yi)除去(qu)管(guan)道內(nei)可(ke)能殘留(liu)的氨，正(zheng)在使(shi)用的儀(yi)器，每次(ci)測(ce)樣(yang)前(qian)，蒸氣(qi)洗滌(di)5min即(ji)可(ke)。較(jiao)長時間未使(shi)用的儀(yi)器，重(zhong)復蒸(zheng)氣(qi)洗(xi)滌，不得少(shao)於(yu)三(san)次(ci)，並(bing)檢(jian)查(zha)儀(yi)器是否(fou)正(zheng)常。仔細檢(jian)查(zha)各個(ge)連(lian)接處(chu)，保(bao)證不漏氣(qi)。 首(shou)先(xian)在蒸(zheng)氣(qi)發生(sheng)器(qi)中加(jia)約2/3體(ti)積蒸(zheng)餾(liu)水(shui)，加(jia)入(ru)數(shu)滴硫酸使(shi)其保(bao)持酸(suan)性，以(yi)避免(mian)水(shui)中(zhong)的氨被(bei)蒸(zheng)出(chu)而(er)影(ying)響結(jie)果，並(bing)放入(ru)少(shao)許沸石(shi)（或(huo)毛(mao)細管(guan)等），以(yi)防(fang)爆沸。沿(yan)小(xiao)玻杯壁(bi)加(jia)入(ru)蒸(zheng)餾水(shui)約20mL讓水(shui)經(jing)插管(guan)流入(ru)反(fan)應(ying)室，但玻(bo)杯(bei)內(nei)的水(shui)不要(yao)放光(guang)，塞(sai)上棒(bang)狀(zhuang)玻(bo)塞(sai)，保(bao)持水(shui)封(feng)，防(fang)止(zhi)漏氣(qi)。蒸(zheng)氣發生(sheng)後(hou)，立即(ji)關閉廢液(ye)排放管(guan)上的開關，使(shi)蒸氣只能進入(ru)反(fan)應(ying)室，導致反(fan)應(ying)室內(nei)的水(shui)迅速沸騰(teng)，蒸(zheng)出(chu)蒸(zheng)氣由反(fan)應(ying)室上端口通過定(ding)氮球(qiu)進(jin)入(ru)冷(leng)凝管(guan)冷卻(que)，在冷(leng)凝(ning)管(guan)下端(duan)放(fang)置壹(yi)個(ge)錐(zhui)形(xing)瓶(ping)接收(shou)冷凝水(shui)。從(cong)定(ding)氮球(qiu)發燙(tang)開(kai)始計(ji)時，連(lian)續(xu)蒸煮5min，然後(hou)移(yi)開煤(mei)氣燈(deng)。沖(chong)洗完(wan)畢，夾(jia)緊蒸(zheng)氣發生(sheng)器(qi)與收(shou)集(ji)器之(zhi)間的連(lian)接橡(xiang)膠管(guan)，由於(yu)氣(qi)體(ti)冷卻(que)壓力(li)降(jiang)低，反(fan)應(ying)室內(nei)廢液(ye)自動(dong)抽(chou)到(dao)反(fan)應(ying)室外(wai)殼中(zhong)，打開(kai)廢液(ye)排出(chu)口夾子放(fang)出(chu)廢液(ye)。如(ru)此清洗2～3次(ci)，再在冷(leng)凝(ning)管(guan)下換放(fang)壹(yi)個(ge)盛(sheng)有硼酸-指(zhi)示劑(ji)混(hun)合液(ye)的錐形(xing)瓶(ping)使(shi)冷凝管(guan)下口浸(jin)沒(mei)在溶(rong)液(ye)中(zhong)，蒸(zheng)餾(liu)1～2min，觀(guan)察(cha)錐(zhui)形(xing)瓶(ping)內(nei)的溶(rong)液(ye)是(shi)否(fou)變(bian)色(se)。如(ru)不變(bian)色(se)，表示(shi)蒸(zheng)餾裝(zhuang)置內(nei)部已洗(xi)幹凈(jing)。移(yi)去(qu)錐(zhui)形(xing)瓶(ping)，再蒸餾1～2min，用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)沖(chong)洗冷(leng)凝器(qi)下口，關閉煤(mei)氣燈(deng)，儀(yi)器即(ji)可(ke)供(gong)測(ce)樣(yang)品(pin)使(shi)用